荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种在PCR扩增反应体系中融入荧光基团的先进技术，利用实时监测每个扩增循环中产生的荧光信号，最终通过标准曲线对未知模板进行定量分析。以探针法荧光定量PCR为例，在PCR扩增过程中，同时加入特异性的荧光探针，该探针的两端分别标记有报告荧光基团和淬灭荧光基团。在反应开始时，探针完好地结合在DNA单链上，报告基团发出的荧光信号被淬灭基团吸收，因此无法检测到荧光信号。随着PCR扩增的进行，Taq酶会降解探针，导致报告基团和淬灭基团分离，从而使荧光监测系统接收到荧光信号，每扩增一条DNA链就会产生一个荧光分子，实现了荧光信号的逐步累积与PCR产物的形成完全同步。

相比传统的PCR检测方法，在扩增反应后需要进行染色处理和电泳分离，并仅能进行定性分析，实时定量PCR技术则能够实现对模板的定量，具有灵敏度高、特异性和可靠性好、自动化程度高以及无污染等优点，使得荧光定量PCR逐渐取代了常规的PCR技术。在PCR扩增的初期阶段，荧光信号的变化不大，接近一条直线，该直线称为基线，可通过自动生成或手动设置进行设定。随着反应进入指数增长期，扩增曲线表现出高度重复性，此时可设定荧光阈值线，其位置可在荧光信号指数扩增阶段的任意位置设定，一般设为标准偏差的10倍。

每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数称为CT值，该值与起始浓度的对数成线性关系，并具有良好的重复性。CT值的主要用途在于计算目的基因的表达量，通常涉及绝对定量和相对定量两个概念。绝对定量旨在测定目的基因在样本中的分子数，而相对定量则用于测定不同样本中目的基因的相对含量，而不需要知道具体的拷贝数。尽管CT值能够用于计算这两种定量结果，但绝对定量实验需使用已知拷贝数的标准品并制作标准曲线，而相对定量则可以不需该步骤。由于制作绝对标准品往往困难，实验室通常选择相对定量的方法来计算基因表达。

自荧光定量PCR技术问世以来，其在生物医疗领域的应用显著推动了科学的发展，主要包括以下几个方面：

1. 核酸定量分析

对传染性疾病的定量及定性分析，例如病原微生物或病毒的含量检测，包括近期流行的甲型H1N1流感、转基因动植物基因拷贝数的检测，以及RNA干扰基因失活率的分析。

2. 基因表达差异分析

比较不同处理样本之间特定基因的表达差异，例如药物处理、物理处理和化学处理等，对特定基因在不同时相的表达变化进行分析，确保cDNA芯片或差异显著性结果的准确性。

3. SNP检测

检测单核苷酸多态性对研究个体对疾病的易感性及对特定药物的反应具有重要意义。这一技术在SNP序列信息已知的情况下，可轻松且准确地进行高通量检测。

4. 甲基化检测

甲基化与许多疾病，尤其是癌症密切相关。通过Laird所提出的Methylight技术，可区分甲基化与非甲基化DNA，提高检测的灵敏度与便利性。

5. 产前诊断

面对遗传性疾病的挑战，产前监测逐渐成为减少病婴出生的重要手段。利用实时荧光定量PCR，从孕妇血液中提取胎儿DNA，检测Y性别决定区基因是一种无创缝合的好方法，易于接受。

6. 病原体检测

利用荧光定量PCR技术对淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等病原体进行定量检测，相较传统检测法具备灵敏度高、取样量少及迅速简便等优点。

7. 药物疗效考核

定量分析乙型肝炎病毒（HBV）及丙型肝炎病毒（HCV）对药物疗效的研究显示，一些药物有效性与病毒载量呈相关，推动了疗效考核的深入发展。

8. 肿瘤基因检测

实时荧光定量PCR可有效检测基因突变及癌基因的表达量，尽管癌症发生机制仍在研究，但与之相关的基因突变现已成为公认的致癌因素。目前该方法已用于多种肿瘤相关基因的表达检测。

综上所述，荧光定量PCR作为一种高效、精确的检测技术在生物医疗领域的应用不断拓展，尤其是EVO视讯在推动该技术的普及和发展方面，做出了巨大的贡献。