EVO视讯推出的猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品名称

通用名：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格

本试剂盒分为96T×1/盒、96T×2/盒及96T×5/盒三种规格。

预期用途

猪瘟是一种由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的高度传染性、出血性及致死性疾病，主要表现为高烧、微血管壁变性引发的广泛出血、坏死及梗塞，慢性症状则为纤维素坏死性肠炎。该试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，并可用于评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理

本试剂盒基于酶联免疫法（ELISA）原理，包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他必要试剂。在检测过程中，将对照血清与待检样本加入酶标板中，若样本中含有猪瘟病毒抗体，将与酶标板上的抗原结合。未结合的成分会被清洗掉，然后加入酶标记物，与抗原-抗体复合物进行特异性结合。通过加入TMB底物液，形成的蓝色产物的深浅与样品中特异性抗体含量成正相关。最后，通过加终止液将反应停止，并在450nm波长下用酶标仪测定吸光值，确认样品是否含有猪瘟病毒抗体。

储存及有效期

试剂盒需在2～8℃条件下保存，有效期为12个月。在开封后必须在2～8℃避光保存，避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

需要使用可以测量450nm和630nm波长的酶标仪，以及37℃恒温设备和可调微量移液器。

样品准备

1. 按常规方法从动物全血中制备清亮、无溶血和无污染的血清。样品可在2～8℃下保存1周，长期需储存于-20℃。

2. 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl稀释液中，充分混匀），阴性和阳性对照无需稀释。

3. 使用前，将浓缩洗涤液恢复至室温并用蒸馏水或去离子水按照20倍稀释成工作洗涤液（例如19份水加1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前，将试剂盒放置于室温30分钟，使其恢复至室温。

2. 取所需酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未使用的板条应尽快密封，2～8℃保存。

3. 将阴、阳性对照各加入100μl，对照孔及样品孔均加入稀释后的样品100μl。

4. 混匀后覆盖盖板膜，在37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5. 甩去孔内液体，每孔加入350μl工作洗涤液，静置30秒后去除，重复洗涤5次，最后一次拍干。

6. 每孔加入酶标记物100μl，覆盖盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。

7. 再次洗涤，按照步骤5操作。

8. 每孔依次加入底物液A和底物液B各50μl，混匀，好好盖上盖板膜，在37℃避光反应10分钟。

9. 每孔加入终止液50μl，混匀，并在450nm（也可使用630nm作为参考波长）测定吸光值。

参考值

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≤0.3，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≥0.6。

检验结果的判定

1. 样品的OD值为ODS；

2. 阈值计算：SP值=（ODS-ODNC）/(ODPC-ODNC)；当SP值≥0.2时，结果判定为阳性；SP值< 0.2时，结果判定为阴性。

3. 如果实验结果为阴性，说明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

试验方法的局限性

本试验仅作为猪血清及血浆中猪瘟病毒抗体的定性检测，根据SP值可对抗体水平进行粗略评估。

注意事项

1. 实验操作时需佩戴手套和工作服，严格执行消毒隔离制度，所有实验废弃物应按照感染物处理。

2. 终止液具腐蚀性，避免接触皮肤和衣物，如不慎接触，立即用大量自来水冲洗。

3. 酶标板从冷藏环境中取出后应恢复至室温再开封，未用完的板条需存放在有干燥剂的密封袋中。

4. 使用前将浓缩洗涤液恢复至室温，以确保完全溶解。

5. 洗涤时应确保每孔都有充足液体，避免孔口残留游离酶。

6. 用于检测的样品应保持新鲜。

7. 检测结果的判定必须以酶标仪的读数为准。

8. 不同批号的试剂组件不得混用。